ABSTRACT The gestation biometrics of the alpaca (Vicugna pacos) are described. The abdominal diameter was determined monthly from 10 pregnant alpacas. In addition, uterus of 49 pregnant alpacas were collected from the Maranganí herd (Cusco, Peru) and classified by gestational age known as mating date (every 30 days from day 30 to 330 [± 15 days]). Gravid uteri were weighed and measured, allantoic and amniotic fluid was removed and measured, and fetal weight and length were determined. The results indicate a slight increase in abdominal diameter until the end of gestation, the fetus gradually increases its weight as gestation progresses, being greater from the sixth month onwards. The total length of the fetus increases from month nine. The amniotic fluid represents less than 18% of the volume of the allantoic fluid, both fluids have low volumes. An increase in fluids could be observed towards month fivem a decrease until month nine, and a subsequent increase until the delivery date.

RESUMEN En el presente estudio se describe la biometría de la gestación de la alpaca (Vicugna pacos). Se determinó el diámetro abdominal en forma mensual de 10 alpacas gestantes. Además, se colectaron 49 úteros grávidos del camal de Maranganí (Cusco, Perú) y fueron clasificados por edad gestacional conocida mediante fecha de empadre (cada 30 días a partir del día 30 al día 330 [± 15 días]). Los úteros grávidos fueron pesados y medidos, se midieron los fluidos alantoideo y amniótico, y se determinó el peso y la longitud del feto. Los resultados indican un ligero incremento del diámetro abdominal hasta el final de la gestación, el feto incrementa su peso gradualmente a medida que avanza la gestación, siendo mayor a partir del sexto mes. El largo total del feto se incrementa desde el noveno mes. El líquido amniótico representa menos del 18% del volumen del líquido alantoideo, ambos fluidos presentan bajos volúmenes. Se pudo observar un incremento de los fluidos hacia el quinto mes, una disminución hasta el noveno mes, y posterior incremento hasta la fecha de parto.

ABSTRACT Knowledge of embryonic and foetal development is extremely important in order to establish normal development parameters, the health of the foetus, and to identify critical periods in the growth curve. One of these processes is the pattern of ossification. The present study describes the ossification pattern in alpaca embryos and foetuses using radiology and diaphanization techniques. Seventeen pregnant female alpacas were used for the collection of embryos and foetuses of various ages (32, 45, 60, 90, 118, 150, 165, 190, 220 and 280 days). The specimens were weighed, measured and radiographed, and later fixed in 10% buffered formalin to be subjected to the diaphanization process in potassium hydroxide and finally stained with Alizarin Red. The description of the specimens indicates that in embryos of 32 and 45 days there are no mineralized structures; however, it can be seen radiopaque structures and signs of mineralization at 60 days, indicating that ossification would be starting between 45 and 60 days of gestation. The bones of the skull and the rib cage are the first to ossify. Ossification occurs consecutively in the vertebral column, thoracic and pelvic limbs, reaching an advanced state of ossification in the last third of gestation.

RESUMEN El conocimiento del desarrollo embrionario y fetal es de suma importancia para poder establecer parámetros de desarrollo normal, la salud del feto y para identificar periodos críticos en la curva de crecimiento. Uno de estos procesos es el patrón de osificación. El presente estudio describe el patrón de osificación en embriones y fetos de alpaca utilizando las técnicas de radiología y diafanización. Se utilizaron 17 alpacas hembra preñadas para la colección de embriones y fetos de variada edad (32, 45, 60, 90, 118, 150, 165, 190, 220 y 280 días). Los especímenes fueron pesados, medidos y radiografiados, y posteriormente fijados en formol tamponado al 10% para ser sometidos al proceso de diafanización en hidróxido de potasio y finalmente teñidos con Rojo de Alizarina. La descripción de los especímenes indica que en embriones de 32 y 45 días no existen estructuras mineralizadas; sin embargo, se pueden ver estructuras radiopacas e indicios de mineralización a los 60 días, indicando que la osificación se estaría iniciando entre los 45 y 60 días de gestación. Los huesos del cráneo y de la caja torácica son los primeros en osificarse. La osificación se presenta de manera consecutiva en la columna vertebral, miembros torácicos y pélvicos, llegando a un estado avanzado de osificación en el último tercio de gestación.

Abstract To characterize the reproductive biology of Scinax acuminatus and contribute to the natural history of this species, the morphology of the reproductive system of males and females was analyzed at anatomical, histological and immunohistochemical levels. The individuals were collected fortnightly between August and December (2016) and January to December (2018). The anatomy of the reproductive system was analyzed in a stereoscopic microscope, and histological preparations staining with hematoxylin-eosin and Masson’s trichromic, PAS and Coomassie Blue was performed as well. To characterize the meiotic-active cells in the testes, immunostaining with the PCNA proliferation protein was performed. There were found females with ovaries with oocytes in different stages of maturity and post-ovulatory females. Males presented continuous spermatogenesis, which could be confirmed by the immunostaining of PCNA in spermatogonia during the cycle. The results of this work serve as a basis for the characterization of the reproductive cycle in S. acuminatus and provide background information on the analysis of spermatogenic activity by IHQ from the study of the immunodetection of the PCNA cell proliferation protein. Future studies will focus on the evaluation of cell death processes during the reproductive cycle in the studied species to compare with those obtained in terms of cell proliferation.

Oviductal molecules have the potential to improve the reproductive biotechnologies. In camelids, knowledge and assessment of the oviductal environment are necessary to successfully develop species-specific reproductive technologies, especially because of the camelids reproductive particularities. Among the oviductal factors, the matrix metalloproteinases/tissue inhibitor of matrix metalloproteinases system (MMPs/TIMPs) should be investigated more thoroughly due to their participation in reproductive processes. Consequently, the current study assayed gene and protein expression of MMPs throughout the llama oviduct. MMPs zymogen and active forms in the oviductal fluid were also characterized. MMP2 and MMP9 transcripts were detected in ampulla, isthmus, utero-tubal junction and papilla, being MMP2 and MMP9 2.15 and 1.10 folds higher in papilla than in ampulla, respectively. In addition, differences in immunolocalization of MMP2 and MMP9 between the epithelial mucosa layers of the oviductal segments were observed. The presence of MMPs in the epithelium suggests their secretion into the oviductal lumen. Coincidently, bands of 62 and 94 kDa, corresponding to MMP2 and MMP9 were detected by zymography in the oviductal fluid. Treatment with an exogenous activator (APMA) suggests that they are present as proMMPs. TIMP2 and TIMP1, the specific inhibitors of MMP2 and MMP9, respectively, were expressed in each oviductal segment, indicating a well-regulated control of MMP proteolytic activity in the oviduct. These findings prove that the llama oviduct produces and secretes MMPs into the oviductal lumen, suggesting that these enzymes may have an unknown role in the preparation of the oviductal environment for gametes, fertilization and early embryo development in camelids.

Las moléculas oviductales tienen el potencial para mejorar las biotecnologías reproductivas. En los camélidos, debido a sus peculiares características reproductivas, el conocimiento del ambiente oviductal constituye una herramienta útil para el desarrollo de tecnologías reproductivas específicas para estas especies. Entre los factores oviductales de interés se encuentran las metaloproteasas de matriz (MMPs) y sus inhibidores específicos (TIMPs), los cuales han sido involucrados en diferentes procesos reproductivos. Por estas razones, en este trabajo se caracterizó la expresión génica y proteica de MMP2 y MMP9 en el oviducto de llama. Además, se analizó la presencia de las formas activas e inactivas (zimógenos) de estas enzimas en el fluido oviductal. Se observó que todos los segmentos oviductales, ámpula, istmo, unión útero-tubal y papila, expresan MMP2 y MMP9, siendo los niveles de expresión de MMP2 y MMP9 más elevados en papila respecto a ámpula; 2,15 y 1,10 veces respectivamente. Asimismo, se observaron diferencias en la distribución de las MMPs a nivel de la mucosa entre los segmentos oviductales. Consecuentemente, bandas con actividad gelatinolítica de 62 y 94 kDa, se detectaron en el fluido oviductal, las cuales corresponderían a las formas inactivas de la MMP2 y la MMP9, respectivamente. Los inhibidores específicos de MMP2 y MMP9; TIMP2 y TIMP1, también se detectaron en los segmentos oviductales, indicando su probable participación en la regulación de la actividad proteolítica de las MMPs en el oviducto de llama. En conjunto, los datos de este trabajo demuestran que el oviducto de la llama produce y secreta MMPs al lumen oviductal; sugiriendo que estas enzimas pueden participar en la preparación del ambiente oviductal para la recepción de los gametos, la fecundación y el desarrollo embrionario temprano en camélidos.

Anatomical and histoachitectonic analyses of coypu (Myocastor coypus) oviduct were performed at sexual maturity. Thirty-four oviducts were segmented into: infundibulum, ampulla, cephalic istmus, middle and caudal. Routine histological techniques were used. Oviducts were observed as tubular and tortuous organs with a wide infundibular surface, a pronounce flexure at junction of the uterine horns and with a colliculus at the utero-tubaric junction. The oviductal wall was composed of the mucosal, muscular and serosal tunics. The mucosal tunic showed foldings that diminished in number, ramification and height from the ampulla to the beginning of the utero-tubaric junction. The lining epithelium was composed of ciliated cells as well as secretory cells. In the infundibulum and isthmus, it was simple and cylindrical, while in the ampoule it was cylindrical pseudo-stratified. In the caudal regions of the isthmus, crypts covered by a cylindrical epithelium with secretroy aspect were observed. The lamina propria was composed of highly vascularized lax connective tissue. The muscular tunic increased its thickness and complexity from the infundibulum to the utero-tubaric junction.

Se efectuaron los análisis anatómico e histoarquitectónico del oviducto del coipo (Myocastor coypus) en la madurez sexual. Se trabajó con 34 oviductos que fueron segmentados en infundíbulo, ampolla, unión ámpulo-ístmica, istmo cefálico, medio y caudal y procesados con técnicas histológicas de rutina. Los oviductos se observaron como órganos tubulares y tortuosos, con amplia superficie infundibular, marcada flexura en la unión con los cuernos uterinos y el desarrollo de un colículo en la unión útero-tubárica. La mucosa presentó plegamientos que disminuyeron en número, grado de ramificación y altura desde la ampolla hasta los comienzos de la unión útero-tubárica. El epitelio de revestimiento estuvo compuesto por células ciliadas y células secretoras. En el infundíbulo y el istmo fue cilíndrico simple, en tanto que en la ampolla fue seudoestratificado cilíndrico. En las regiones caudales del istmo se observaron criptas revestidas por un epitelio cilíndrico de aspecto secretor. La lámina propia fue de tejido conectivo laxo y muy vascularizado. La túnica muscular incrementó su grosor y complejidad desde el infundíbulo a la unión útero-tubárica.

Reproductive aspects of Dendropsophus sanborni (Anura, Hylidae) in northeastern Argentina. The aim of this investigation was to characterize reproductive aspects of Dendropsophus sanborni (Schmidt, 1944) (Anura, Hylidae) in the northwest of Corrientes province, in northeastern Argentina. The reproductive cycles of males and females, the existence of sexual dimorphism and the male’s vocalization period were analyzed. Samplings were made from September 2011 to August 2012. Dendropsophus sanborni showed a prolonged reproductive pattern because reproductive activity was observed during most part of the year. Calling males were recorded all months except in July. The spermatogenic cycle can be characterized as potentially continuous. In males, snout-vent length was significantly correlated with mean testicular volume. The species showed sexual dimorphism in body mass, with females larger than males. Post-ovulatory females were found from March to June and most females had oocytes at different stages of maturity, with abundant post-vitellogenic oocytes from August to December.

El objetivo del presente estudio fue caracterizar aspectos reproductivos de Dendropsophus sanborni (Schmidt, 1944) (Anura, Hylidae) en la región noroeste de la provincia de Corrientes, al Nordeste de Argentina. Para esto, se analizó el ciclo gonadal de machos y hembras, la existencia de dimorfismo sexual y el periodo de vocalización de los machos. Los muestreos se efectuaron desde Septiembre de 2011 hasta Agosto de 2012. Dendropsophus sanborni exhibe un patrón reproductivo prolongado, dado que la actividad reproductiva ocurre durante gran parte del año. Se registraron machos en actividad de vocalización durante todos los meses excepto en julio. El ciclo espermatogénico puede ser caracterizado como potencialmente continuo. En los machos hubo correlación significativa entre la longitud hocico-cloaca y el volumen testicular medio. La especie presentó dimorfismo sexual en relación a la masa corporal, siendo las hembras mayores que los machos. Se encontraron hembras post-ovulatorias desde Marzo a Junio y una mayor proporción de hembras con ovocitos en diferentes estados de maduración, con abundantes ovocitos post-vitelogénicos, en los meses de Agosto a Diciembre.

Nothura maculosa is a South American Tinamidae with a marked seasonal reproductive pattern. This work describes ovarían seasonal changes in this species related to gonadotrope (GTHs) population. Ovary and pituitary samples were collected monthly from adult birds during four annual periods. They were fixed in Bouin's solution and processed for light microscopy. The data of post-fixation gonadal weight were analysed using STATISTIX 4.0. Histological sections of the ovaries were stained with H/E, PAS and Goldner-Masson trichrome. Single and double immunostaining were applied on pituitary sections with anti-chicken-FSH and anti-chicken-LH antibodies. The samples were analysed in quarterly periods of the year, Pl: March-May (resting stage); P2: June-August (developing stage); P3: September-November (reproductive stage); P4: December-February (involutive stage). Ovary weight (ow) significantly varied among periods (p<0.001). During Pl, only primordial and previtellogenic follicles were observed, ow 0.09±0.01 g (n=25); during P2, developing follicles with signs of vitellogenesis were detected, ow 0.13+0.01 g (n=14); during P3, máximum follicular development was found, ow 0.9±0.15 g (n=39); P4 exhibited great variability in follicular stages, ow 0.18+0.18 g (n=19). Involutive atresia was observed in all the periods, while bursting atresia and post-ovulatory follicles were only characterized at P3 and P4. The GTHs containing few LH and FSH immunoreactive (ir) granules were predominant during P1-P2. The GTHs with LH ir granules were abundant in intermedíate zone and caudal lobe in P3 and P4 while few cells contained both types of granules. The number of FSH cells was increased during P3 and P4. The histological ovarían changes were narrowly correlated with the variations in the gonadotrope population.

Nothura maculosa es un tinámido sudamericano que presenta marcada estacionalidad reproductiva. Este trabajo describe los cambios estacionales del ovario de esta especie, en relación con la población de gonadotropas (GTHs). Muestras de ovarios y pituitarias de ejemplares adultos fueron colectadas mensualmente durante cuatro años; se fijaron en solución de Bouin y procesadas para M.O. Los datos del peso gonadal posfijación fueron analizados usando STATISTIX 4.0. Los cortes de ovarios fueron coloreados con H/E, P.A.S. y Tricrómico de Goldner-Masson. En cortes de adenohipófisis se aplicó inmunocitoquímica simple y doble (sistema ABC, Vector Lab.), empleando anticuerpos anti-pollo FSH y anti-pollo LH. Las muestras se analizaron en períodos trimestrales de cada año (P): Pl: Marzo-Abril-Mayo (etapa de reposo), P2: Junio-Julio-Agosto (etapa de desarrollo), P3: Septiembre-Octubre-Noviembre (etapa reproductiva), P4: Diciembre-Enero-Febrero (etapa involutiva). El peso de los ovarios (PO) varió significativamente entre los periodos (p< 0.001). Durante Pl, sólo se observaron folículos primordiales y pre-vitelogénicos, PO 0.09±0.01 g (n=25); durante P2, se detectaron folículos en desarrollo con signos de vitelogénesis, PO 0.13+0.01 g (n=14); durante P3, se encontró máximo desarrollo folicular, PO 0.90+0.15 g (n=39); P4 exhibió gran variabilidad folicular, PO 0.18+0.18 g (n=19). La atresia involutiva se observó en todos los períodos, mientras que la atresia explosiva y los folículos postovulatorios caracterizaron a P3 y P4. Las GTHs conteniendo escasos granulos LH y FSH inmunoreactivos (ir) predominaron durante Pl y P2. Las GTHs con granulos LH¡> eran abundantes en la zona intermedia y en el lóbulo caudal en P3 y P4 mientras que escasas células contenían ambos tipos de granulos. El número de células FSH¡> se incrementó durante P3 y P4. Los cambios histológicos del ovario se correlacionaron estrechamente con las variaciones en la población de gonadotropas.